الجهاز المناعي م: طرق تعطيل وتضعيف الأحياء الدقيقة المستعملة في اللقاحات :

طرق تعطيل وتضعيف الأحياء الدقيقة المستعملة في اللقاحات :

هناك عدة طرق نختصرها فيما يلي :

1. القتل الحراري :
قد يسبب قتل الأحياء المستخدمة التي ربما تسبب بدورها تغييرات غير طبيعية ، وتعتبر هذه الطريقة تقنية قديمة وغير جيدة .
2. المعالجة الكيميائية :
وذلك بإضافة مركبات كيميائية مثل الفورمالدهايد .

3. تكييف الكائن الحي الدقيق بالنمو في ظروف غير طبيعية وبذلك تفقد تكيفها إلى مضيفها السوي ، فعلى سبيل المثال تتم تنمية الميكروباكتيريا الخاصة بالأبقار لمدة 13 عاماً في وسط مشبع بالصفراء ( Bile )وتنمية جرثومة الباسترلا في ظروف ناقصة التغذية لتحضير لقاح باستور لكولرات الدواجن .

4. زرع الكائن الحي في ظروف غير سوية ، فعند زراعة الطاعون البقري في الماعز ، على سبيل المثال ، وجدت كائناته شديدة القوة على الأبقار فتم تمريرها بزرعها في الأرانب فوصلت قوتها إلى مستوى مقبول لتحصين الأبقار .

ويمكن تضعيف هذه الكائنات أكثر بزرعها في زرع نسيجي Tissue Culture .

5. تنمية الكائن الحي في البيض وذلك مثل تصنيع لقاحات دستمبر الكلاب والسعار واللسان الأزرق ، أو بزرعها في بيض من نوع آخر ، فعلى سبيل المثال يمكن تضعيف حمى أنفلونزا الدواجن بتنميتها في بيض الحمام .

6. استخدام أحياء دقيقة ذات علاقة مكيفة للنمو من نوع آخر . وهذا يعني تضعيف الكائن الحي ولكن بإتباع ما فعله العالم جنر Genner حينما استعمل جدري الأبقار كلقاح في الإنسان . وعلى هذا النحو تم استعمال حمى الحصبة لوقاية الكلاب في الدستمبر ، وحمى الإسهال البقري لوقاية الخنازير ضد الكوليرا . والسبب يعود إلى طبيعة العلاقة المستضدية القائمة بين هذه الأمراض .

7. استخدام الكائن الحي الأصلي القوي جداً في التحصين وهذا ما فعله الصينيون للوقاية ضد مرض الجدري وذلك لعدم وجود تقنية أفضل منها في حينها . كما تم استخدام هذه التقنية في الوقاية من مرض الأورف المعدي(Contagious Orf) وذلك بمسح القشور الالتهابية الجافة المأخوذة من الحملان المريضة ومسحها على خدوش السطح الداخلي لأفخاذ حملان أخرى لم تمرض . ويتكون الالتهاب في الموضع نفسه(السطح الداخلي للفخذ ) ولا تكون له تأثيرات غير مرغوب فيها مثلما لو حدث في الفم حيث يؤدي إلى منع الحيوان من الأكل وبالتالي عدم نموه وربما نفوقه في حالات نادرة . والحيوانات الملقحة بهذه الطريقة هي في الحقيقة حيوانات حقيقية المرض فيفضل عزلها عن القطيع غير الملقح لعدة أسابيع . وبهذه الطريقة تصبح هذه الحيوانات منيعة .

طريقة التضعيف المفضلة :

وهي تتضمن تنمية الفيروس بتمريره في زرع نسيجيTissue Culture لفترات طويلة . ومعظم اللقاحات الحالية تتم بهذه الطريقة ويمكن استعمال مزارع نسيجية مختلفة لكن عادة يجري تنمية الفيروس في مزارع نسيجية من ذات النوع الذي سيستعمل من أجله اللقاح وذلك لتقليل التأثيرات الجانبية غير المرغوب فيها . ويتم تضعيف الفيروس بزرعه في خلايا ليست مكيفة له ، فمثلاً فيروس الدستمبر يحب الخلايا اللمفاوية لذا يمرر في خلايا من كلية الكلب ، وبتكرار التمرير يفقد الفيروس قوته ويصبح لقاحاً آمناً وفعالاً .
المساعدات هي مجموعة المواد التي يوضع أو يحمل عليها اللقاح لكي يعزز الاستجابة المناعية السوية .

ولقد استعملت الكثير من المركبات المتنوعة بوصفها مساعدات في مجال التلقيح الإنساني والحيواني على الرغم من عدم الالمام الكامل بطريقة عمل العديد منها . وأبسط أنواع المساعدات هي التي تعمل على تأخير تحرر المستضد ( الانتيجين ) إلى داخل الجسم .

وكما هومعلوم فإن توجيه وتحريك الجهاز المناعي يتم بوساطة المستضد ( Antigen Driuen ) فالجهاز المناعي يستجيب لوجود المستضد ولكنه يتوقف عن الاستجابة حال إزالة المستضد من جسم الحيوان
أمثلة عن كيفية تأخير المساعد لتحرر المستضد :
1- المساعدات المكونة للبؤر :

هي مساعدات غير ذؤوبة تكون بؤرة موضع الحقن مما يساعد على تحرر المستضد ببطئ شديد مما يعني إطالة الاستجابة المناعية , لأن وجود المستضد يعني وجود استجابة مناعية مستمرة , وأمثلة هذا النوع :
- هيدروكسيد الألمنيوم .
- فوسفات الألمنيوم .
- سلفات البوتاسيوم والألمنيوم .
يتكون عادة الورم الحبيبي موضع الحقن ويكون المستضد داخل الورم ويتحرر ببطئ . وهناك مساعدات أخرى تعمل بطريقة مشابهة لهذه الطريقة وهي البربليوم والسليكا والكاولين .

2- مساعدات تحفز الاستجابة الالتهابية الموضعية :
هناك مساعدات تحفز وتساعد على حدوث التهاب موضع الحقن وبالتالي تكوين أنسجة الورم الحبيبي حول موقع الحقن . ومن أمثلة هذه المساعدات مستحلب الماء والزيت ويستخدم هذا النوع تحديدا في بعض اللقاحات خاصة لقاح الميكوبكتيريا المقتولة غير أنه لا يستخدم في تلقيح حيوانات اللحم لأن هذا المساعد يؤدي إلى تلف العضلات موضع الحقن . وهناك بعض العوامل المنشطة للسطوح مثل الجينات الصوديوم ـ اللنولين والليزولستين وفيتامين Aوالسابونين . وتعمل هذه المساعدات جميعها حول أغشية الخلايا مفرزة الفاعلية المناعية . ولا تعرف حقيقة عملها ولكن ربما تقلل من تحطيم المستضد بوساطة الأجسام المضادة . وهناك أيضا مجموعة أخرى عملها مشابه للمساعدات وهي العقاقير المفرزة للمقاومة , وأشهر هذه العقاقير عقار الليفاميزول . والليفاميزول عقار يستخدم لإبادة الديدان الداخلية , ويبدو أن له طريقة عمل مشابهة لعمل هرمون الغدة الدرقية .
اللقاحات المختلطة اصبح من الشائع استعمال مزيج متعدد من الأحياء الدقيقة في اللقاحات خاصة عندما تعاني الحيوانات كالأبقار , على سبيل المثال من أكثر من مرض واحد أثناء إصابتها بمرض في الجهاز التنفسي . فقد تصاب البقرة بمزيج من الأمراض التالية:
1التهاب القصبة والأنف.................................................. ......
2الإسهال الفيروسي.................................................. ...........
3حمى البارا أنفلونزا.................................................. ..........
4الباسترلا .................................................. ........................

قد يكون هذا الخليط واضحا في حالة انتشار أوبئة تنفسية وفي حالات صعوبة التشخيص , ومن ثم فإن هذا النوع من اللقاحات يحمي الأبقار بأقل جهد ضد طيف واسع من الأمراض . كما أنه يمكن تلقيح الكلاب بمزيج من ستة أو أكثر من الأحياء الدقيقة .وعموما فإن هذه الإجراءات تعتبر اقتصادية من ناحية الوقت والجهد إلا أن إنتاج هذه الخلطات يحتاج إلى جهد وتقنيات متقدمة مما قد يزيد من تكلفتها الإنتاجية وبالتالي قيمة التلقيح . ويجب التنبية بعدم مزج مستضدات مختلفة لأنها قد تتنافس مع بعضها , اما اللقاحات الممزوجة من الشركات المنتجة لها فإن هذه الشركات لابد أن تكون قد أخذت بعين الإعتبار ضوابط هذه الخلط والتنافس .

برامج التحصين :

1- على الرغم من عدم إمكانية وضع خطط مناسبة لكافة اللقاحات البيطرية المتوفرة إلا أنه يمكن تحديد مبادئ معينة شائعة في كافة طرق التمنيع الفاعل . وحيث إن الحيوانات الحديثة الولادة لديها مناعة منفصلة عن الأم فإنه لا يجري تحصينها لعدم ضمان ذلك التلقيح . وفي حالة اعتبار التحفيز المناعي ضروريا فإنه يجب تحصين الأم في الأدوار النهائية من فترة الحمل . ويجب أن يكون التحصين متزامنا معه بحيث تتكون المستويات العالية من الضد في فترة تكوين اللبن .
2- بعد الولادة يصبح التحصين الفاعل والناجح ممكنا عادة عندما تكون المناعة المنفصلة المكتسبة من الأم ضئيلة جدا . وبما أنه لا يمكن تحديد موعد معين لفقدان مناعة الأم فإنها تعطي الجرعة الثانية في الأسبوع الخامس عشر من عمر الجنين . اما الجرعة الأولى فعادة يتبع فيها تعليمات منتج التحصين .
3- تختلف فترة الحقن المعززة حسب نوعية التحصين :
- التحصينات الميتة : تحتاج إلى تعزيزات متكررة بين فترة وأخرى ربما كل أربعة أو ستة شهور .
- التحصينات الحية : عادة تنتج مناعة ذات دائمية طويلة لذا قد لا تحتاج إلى تعزيز أو ربما احتاجت إلى تعزيز واحد كل سنة أو سنتين أو ثلاث سنوات .

4- ويحدد نوع المرض الفترة بين التعزيزات , فبعض الأمراض تكون موسمية , وتصبح الحاجة إلى حقن التعزيز ملحة قبل توقع وقت إنتشار المرض , فمثلا تعزز تحصينات الجمرة الخبيثة في فصل الربيع , وتحصينات الكلوسترديا قبل الخريف , وإخراج الغنم للحقن وبعض الأمراض التي تنتقل بالحشرات تحصن قبل موسم إنتشار الحشرة المعنية .

إعطاء التحصينات :
يختلف التحصين وطريقة إعطائه للحيوان بنوعية الاستجابة المناعية المطلوبة , وللإستدلال على ذلك نورد ما يلي :
1- يعتبر التمنيع بالحقن تحت الجلد أو العضل هو النمط الشائع والسهل في معظم الأنواع كما أنه هو النمط المطلوب في الحالة التي تكون فيها المناعة البدنية مطلوبة ومهمة .
2- عندما تكون المناعة الموضعية ضرورية فيكون من الأنسب إعطاء التحصين في موقع الغزو الشديد أو في الأعضاء الأكثر تضررا , لذانجد أنه يتم التحصين عن طريق الأنف في حالات الأمراض التالية :
التهاب الأنف والزكام الالتهابي ومرض نيوكاسل الدواجن ومرض التهاب الشعب الهوائية المعدي . وفي حالات الأعداد الكبيرة تستخدم تقنية التضبيب حيث تستنشق كافة الحيوانات مادة التحصين .
3- كما يمكن مزج التحصين بالماء أو الطعام كما في كثير من لقاحات الدواجن .
4- ويمكن تحصين الأسماك بإضافته في مياه التربية الخاصة به .

الإخفاق في التحصين :
تعمل الاستجابة المناعية مثل باقي الظواهر الحياتية على :منح الوقاية المطلقة إلا أنها لا تكون متساوية في الأفراد المحصنين كلهم . وتتأثر الاستجابة المناعية في أية مجموعة عشوائية كبيرة بعدد كبير من العوامل , ولكن يفترض أن تتبع هذه الاستجابة نمط الانتشار السوي . وهذا يعني أن معظم الحيوانات تستجيب استجابة بصورة معتدلة ومعقولة ونسبة قليلة منها قد تكون درجة استجابتها المناعية متدنية , وبهذا لا تصبح الحيوانات محصنة رغم أنها تلقت التحصين المعني . وهذه النسبة غير المحصنة تعتمد أهميتها في المجموعة العشوائية المعينة حسب خطورة المرض وطبيعة ونوع التحصين . فمرض مثل الحمى القلاعية ذو وبائية عالية جدا ووجود أعداد ولو قليلة من الحيوانات لم تستجب بطريقة جيدة أو معتدلة يعني أنه لم تتم السيطرة على المرض . ونجد من ناحية أخرى أمراضا لا تنتقل بسرعة مثل السعار فإن 70%من الوقاية قد تكون كافية لمنع انتقال المرض بصورة مؤثرة داخل المجموعة . ويمكن تلخيص الإستجابة والمناعية حسب الانتشار الطبيعي للاستجابات المناعية في مجموعة الحيوانات الملقحة :

الإنتاج والسيطرة على التحصينات :
يتم انتاج المواد الحيوية ( البيولوجية ) البيطرية في كثير من بلدان العالم المتقدم تحت السيطرة التامة للجهات الرسمية في البلد المعني . وتسيطر هذه الجهات على كل ما يخص الانتاج والتوزيع والاستخدام وتقوم بإجراء الفحوصات الدورية اللازمة في أطوار الإنتاج كافة وأثناء التخزين حيث يتم التأكد من سمية وعقم وفعالية المادة .

ونلخص عدة ملاحظات في هذا الجانب :
1- الأحياء الدقيقة الموجودة في التحصينات تنفق تلقائيا بعد فترة من التخزين حتى ولو كان التخزين ممتازا . لذا فإن إجراء الاختبارات الدورية أثناء التخزين مهمة جدا .
2- عدم استخدام التحصينات بعد إنتهاء فترة استخدامها المدونة على العبوة مهما كانت جودة ودقة التخزين .
3- يجب عدم تجميد التحصينات المحتوية على مواد مساعدة بشكل معلق .
4- إحتواء التحصينات على مواد حافظة مثل الفينول والمرثيوليت ليس معناه السيطرة على التلوث الجرثومي لذا يجب رمي العبوات بعد الاستخدام الجزئي للتحصينات وعدم تخزينها وإعادة استعمالها .
5- يجب أن تظل التحصينات المجففة ( مثل تحصينات الطيور ) محكمة الإغلاق وبعيدة عن الضوء وجيدة التخزين حتى موعد استخدامها حسب وصف الشركة المنتجة لها

كيف تبدأ العملية المناعية

وأضيف طريقة طبيعية وسهلة لانتاج اللقاح ذاتيا من نفس المريض بأحد طريقتين:

1.الأولي هي :

أ)انتاج اللقاح من المريض وذلك بتضعيف الأنتيجين(الجسم الغريبag)
ب) أو بقتله علي الجلد باستخدام التقنيات الطبيعية كتكسيره بالحرارة (ماء مغلي علي بقعة منه علي الجلد) فيقتل الأنتيجين علي تلك المساحة المنتقاه لإحداث الحرق المحدود *.ونقوم بعد ذلك بتثبيت هذا الجرافت من الأنتيجين المتكسر شفراته الوراثية باستخدام شاشة مفزلنة أو عادية وتركها اسبوعا حتي تلتئم تلقائيا .
3.الثانية :هي أخذ جزء من دم المريض من الوريد لحقنه بالعضل يساوي من 5 سم الي 10 سم ليحدث بذلك تكسير(Crushing أوfragmentation) للأنتيجين الدائر في دم المريض وذلك بحبسه داخل العضلة المحقون فيها هذا الجزء من دمه حيث تتوفر بمناخ العضلة وسائل تحليل جسم الأنتيجين وتكسيره وتحليل الشيفرة الوراثية التي لم يتعرف عليها جهاز المناعة قبلا ونقدم بذلك دراسة كاملة لخلايا البلعميات الكبيرة عن السر الشفري للأنتيجين وتبدأ من هنا العملية المناعية وذلك كالآتي (آلية العمل مختصرة):
1.تكون البلاعم الكبرى أول من يكتشف وجود أنتيجين الخلايا السرطانية في الدم بعد تكسيره علي الجلد وكشف شفرته الوراثية حيث كانت مجهولة قبل موت الخلايا السرطانية علي الجلد.
2.فتقوم البلاعم الكبري بإبلاغ الخلايا التائية T.HELPER CELLESالمساعدة.
3.تقوم الخلايا التائية المساعدة المساعدةT.HELPER
بإرسال إشارات كيميائية لإبلاغ الخلايا البائية B lymphocyetes والخلايا التائية القاتلة.
4.تبدأ الخلايا بي (الخلايا البائية) بإنتاج الأجسام المضادة.
5.تقوم الخلايا التائية القاتلة بالهجوم المباشر وإفراز السموم ضد الأنتيجينات .
6.بعد القضاء على الأنتيجين تقوم خلية تي منظمة بكبت عمل الخلايا المقاومة حتي لا تهاجم خلايا الجسم نفسه ، وتنظم نظام المناعة.
7.بعد ذلك تتحول بعض خلايا تي التي اشتركت في مقاومة مستضد إلى خلية تي ذاكرة ؛ حيث تتعرف بسرعة على المستضد إذا أصاب الجسم مرة أخرى وتعمل على مقاومته على الفور - بقضل ذاكرتها.
T HELPER CELL)L)خلية تي مساعدة :خلايا تي المساعدة : Helper. T. Cells) تُسمى أيضًا CD4+ T cells، هذه الخلايا نتيجة دورانها في الدم تكون أول من يتلقى الإشارة من البلاعم الكبرى بوجود جسم غريب فتسارع للتعرف على هذا الجسم بواسطة مستقبلاتها السطحية. ثم ترسل إشارة كيميائية منبّهة (كوستيمولاتور) تساعد على نمو الخلايا البائية ، فتنتج الأجسام المضادة ؛ كذلك ترسل إشارات أخرى تؤدي إلى نضج الخلايا التائية الكابتة والقاتلة. (TC CELLEs)خلية تي قاتلة :(تقوم الخلايا تي القاتلة ( Cytotoxic T cells (TC cells) بتمويت الخلايا المصابة بفيروس وخلايا الأورام ، وهي تشارك في عملية رفض الجسم للأعضاء الغريبة المزروعة فيه وتكون مأخوذة من شخص آخر في العمليات الجراحية . كما تعرف تلك الخلايا بأنها خلايا تي CD8+ T cells تبدي البروتين CD8 على سطحها ؛ فتتعرف على أهدافها حيث تربط نفسها بأنتيجين يكون معلما بجزيئاتMHC class I والتي توجد على أسطح جميع الخلايا ذات نواة . (المعقدMHC يسمى بالعربية : معقد التوافق النسيجي الكبير)،تنتج خلايا تي المنظمة الأدينوسين IL-10, adenosine وجزيئات أخرى تعمل على تنشيط خلايا تي CD8+ إلى حالة لا تضر بالجسم ، إذ لو نشطت خلايا تي زيادة عن اللزوم فتظهر على الجسم أعراض مناعة ذاتية حيث تهاجم خلايا الجسم السليمة أيضا.(Treg cells):خلية تي منظمة ،الخلايا تي المنظمةRegulatory T cells (Treg cells, كانت تعرف في الماضي بخلايا تي الكابتةsuppressor T cells وهي ضرورية بالنسبة لتفعيل سماحية المناعة. واهميتها تتلخص في أنها تهديء من عمل خلايا تي عند نهاية عملها في القضاء على دخيل غريب عن الجسم وتكبت خلايا تي الزائدة النشاط بحيث لا تهاجم الخلايا السليمة للجسم (مناعة ذاتية ؛ تلك الخلايا تي الزائدة النشاط تكون قد هربت من عملية انتقاء تتم في الغدة الزعترية بعد عمليات القضاء على مستضد .،يوجد من خلايا تي المنظمة CD4+ Treg cells بحسب البحوث الجديدة نوعان : FOXP3+ Treg cells و.... FOXP3− Treg cells .، الخلايا تيT المنظمة يمكن ان تنشأ في الغدة الزعترية وتعرف عندئذ بـخلايا تي منظمة زعترية thymic Treg cells, أو في أجزاء أخرى في نظام المناعة ، في تلك الحالة تسمى خلايا تي منظمة ليست زعتريةperipherally derived Treg cells. ذلك النوعان كانا يعرفا في الماضي بأن الناشئة في الغدة الزعترية بأنها خلية تي طبيعية وأما الأخرى فكانت تعتبر أن مناعيتها مكتسبة . وكلا النوعان يحتاج إلى معامل ترجمة جين FOXP3يستخدم في التعرف على الخلايا . وإذا حدث وان تغيرالجين FOXP3 بحيث يمنع نشأة خلايا تي المنظمة ، فإن ذلك يؤدي إلى أحد أمراض المناعة الذاتية المميتة والمعروف بـ متلازمة إيبيكس IPEX Syndrome. ( Memory T cells). خلية تي ذاكرة:خلية تي ذاكرة Crystal Clear app kdict.png،(Memory T cells) وهي المسؤولة عن حفظ الذاكرة المناعية النوعية الّتي تلي الاستجابة المناعية الأولية.تنحدر خلية تي الذاكرة من خلية تي تصارعت مع أنتيجين معين وتحتفظ لمدة طويلة في ذاكرتها بأن هذا الأنتيجن عدو للجسم . وينمو عددها بأعداد كبيرة كخلايا تي فاعلة حين إصابة الجسم بنفس المستضد مرة أخرى فتقوم على الفور في مقاومته . يوجد من خلايا تي الذاكرة ثلاثة أنواع : خلايا تي ذاكرة مركزية (TCM cells)ونوعان فعالان أو مؤثرانTEM cells وTEMRA cells).تنتج خلايا تي الذاكرة إما البروتينCD4+ أو CD8+.تبدي خلايا تي ذاكرة البروتينCD45RO على سطحها . (NKT cells)خلية تي طبيعية.تربط خلايا تي الطبيعية-Natural killer T cells (NKT cells –ولا يصح الخلط بينها وبين خلايا المناعة الطبيعية ) بين نظام المناعة الطبيعية وبين نظام المناعة المكتسبة.على عكس خلايا تي العادية التي تتعرف على ببتيد أحد المستضدات يقدمه جزيء التوافق النسيجي الكبيرmajor histocompatibility complex(معقد التوافق النسيجي الكبير أو مختصراMHC )، فإن خلية تي الطبيعية تتعرف على غليكوليبيد لاحد المستضدات يقدمة جزيء يسمى CD1d . وفي حالة تنشيط خلايا تي الطبيعية فهي تقوم بمهمة مشابهة لكلا من خلايا تي المساعدةTh وخلايا تي القاتلة Tc (أي تنتج سيتوكين وتنتج جزيئات قاتلة قادرة على التعرف والقضاء على خلايا بعض الاورام وخلايا مصابة بفيروس الهربس(Gamma delta T cell (γδ T cells) خلية تي جاما دلتا تمثل خلايا تي غاما دلتاGamma delta T cell (γδ T cells) فئة صغيرة من حلايا تي ، وهي تتميز بوجود مستقبل TCR على سطحها . كثير من خلايا تي لها مستقبل T cell receptor (TCR) مكون من سلسلة غليكوبروتين يسمى مسلسلات α- و β- TCR . إلا أن خلايا تي غاما دلتا γδ T cells فيتكون المستقبل TCR من مسلسلتي γ-غاما و δ-دلتا. توجد تلك الأنواع من خلايا تي في الإنسان والفئران بنسبة صغيرة ، نحو 2% من خلايا تي. ولكن في الأرانب والخراف والدجاج فتوجد من خلايا تي غاما دلتاγδ T cellsبنسب كبيرة قد تصل إلى نحو 60% من كل خلايا تي لديها. ولا يزال غير معروف ما هو جزيء المستضد الذي يتسبب في تنشيط الخلايا تي غاما دلتا.ويبدو أن خلايا تي غاما دلتا لا يلزمها تقديم معقد MHCلها فهي تستطيع التعرف على بروتينات كاملة أكير من التعرف على أجزاء من الروتين يقوم جزيء MHCبتقديمه لها .رابط 1 رابط 2 رابط 3